Иммуноферментный анализ

Фермент-субстратные системы, наиболее часто используемые в твердофазном ИФА

Фермент	Субстрат	Способ	Длина волны наблюдения (н/м)	Чувствительность нг / образец
Щелочная фосфатаза	Паранитрофенилфосфат 4-метилумбеллиферил-фосфат Н-аденозинмонофосфат	Фотометрия Флуорометрия Радиометрия	400,405 450(360) -	0,5-20 10 -4 -10 -2 10 -2
Пероксидаза	аминосалициловая кислота Ортотолуидин (ОТ) 0ртофенилендиамин (ОФД) Ортодианизидин (ОД) Парагидроксифенилпропионовая кислота	Фотометрия - //- - //- - //- Флуорометрия	450,474,520 630 450,492 400 405(320)	100 - 2,5 20 5*10 5
b -галактозидаза	Ортонитрофенил- b - D -галактозид 4-метилумбеллиферил- b - D -галактозид Флуоресцеин-ди ( b -галактозид )	Фотометрия Флуорометрия Флуорометрия	410 , 420 450(360) 450(360)	0,01-10 10 -6 —10 -2 2*10 -2

*Для фотометрических измерений указаны только наиболее часто используемые длины волн наблюдения; для флюорометрических измерений - длины волн флюоресценции и возбуждения (в скобках).

Специфичность диагностической системы не зависит от выбора фермент-субстратной пары и определяется в основном чистотой и гомогенностью используемых при конструировании диагностикума препаратов антигенов и антител. Использование в ТФИФА не гетерогенных антиген-содержащих препаратов и даже не очищенных бактерий и вирусов, а индивидуальных бактериальных и вирусных белков - вот единственный, хотя и трудоемкий путь повышения специфичности диагностических систем. То же можно сказать и о препаратах, используемых в ТФИФА иммуноглобулинов, - желательно использовать не цельные сыворотки и даже не суммарные гаммаглобулиновые фракции этих сывороток, а аффинноочищенные или моноклональные антитела.

Особой популярностью в настоящее время у нас в стране пользуются иммуноферментные конъюгаты на основе пероксидазы хрена. Это, вероятно, связано с доступностью сырья для выделения этого фермента, относительно легкостью очистки, достаточно высокой стабильностью, и большим числом хромофорных и флуорохромных субстратов Тем не менее следует подчеркнуть, что два других достаточно часто используемых в ТФИФА фермента - щелочная фосфатаза и b -галактозидаза - в некоторых случаях имеют целый ряд преимуществ перед пероксидазой. Это, во-первых, высокая стабильность, растворимость и нетоксичность субстратов, а, во-вторых, возможность использования относительно недорогих флуорохромных субстратов, применение которых резко повышает чувствительность анализа.